1557年，接替死去的前任骑士团大团长，新当选圣约翰骑士团大团长的人是让·帕里索·德·拉·瓦莱特。罗得岛时代还不到30岁的骑士，此时也已63岁。但是，这个被誉为“无比纯粹的法国骑士、毫无掺假的加斯科涅精神之主”的人，即使年过六十，长年练就而成的钢铁般的身体和精神也没有衰弱。他对消灭异教徒，尤其要对迫使圣约翰骑士团撤出罗得岛的土耳其进行复仇充满激情。

        对此激情进行充分发挥的机会，在他就任骑士团大团长8年之后终于到来。1565年，土耳其为攻占马耳他岛派来大军。马耳他岛攻防战由此打响。此时土耳其的苏丹仍是在罗得岛见过拉·瓦莱特的苏莱曼。但是，已被称为大帝的苏莱曼此时也年过七十，鲜有亲临战场的机会。进攻马耳他岛的任务由臣下负责，他自己则待在君士坦丁堡开满郁金香的托普卡帕宫没有出动。相反，与苏丹同岁的拉·瓦莱特却身先士卒地站在了前线。从罗得岛攻防战算起，这是时隔43年之久，土耳其帝国与圣约翰骑士团的“再会”。

        1565年春，土耳其军号称集结了2 000艘船（这一数字怎么想都有过度夸张之嫌），用地中海历史中从规模上说空前绝后的大舰队运送5万大军，从君士坦丁堡启程开往马耳他岛。总指挥是那个穆斯塔法帕夏。他在罗得岛攻防战中因对总攻失败负责而被降职为叙利亚总督，但也因在之后的波斯战役和匈牙利战役立下功劳而恢复职位。也许是为了让他雪耻，苏莱曼再次委任他担任攻打圣约翰骑士团行动的总指挥。

        防守方有540名骑士、1 000名西班牙士兵，以及佣兵和马耳他人共4 000人。他们以基本等同于罗得岛时的防卫力量与土耳其再次对抗。总指挥是拉·瓦莱特。罗得岛攻防战时28岁的年轻法兰西骑士此时已经71岁。

        但是，即使排除苏丹没有亲自督战这一点，与罗得岛攻防战相比，这次的马耳他攻防战对土耳其方面来说还有几个不利之处。

        第一，进攻兵力只有罗得岛时的二分之一。而且，在罗得岛，进攻方可以期待的来自叙利亚和埃及且人数基本相同的援军，在马耳他则没有指望。

        第二，与君士坦丁堡到罗得岛的距离相比，君士坦丁堡到马耳他岛的距离有两倍之远。而且，上一次可以一直沿着本国领土小亚细亚陆路行军，海上从马尔马里斯到罗得岛的距离还不到50千米，但这次全部是海路，而且距离也超过了1 600千米。不光是士兵，大炮、炮弹、火药等所有一切，甚至粮食也必须运送到这么远的地方，而且还是一次全部运完。上一次可以从马尔马里斯到罗得岛进行穿梭运输，但在马耳他岛没有这种便利。

        当然，北非是土耳其领土，却不是苏丹的直辖领土，而是委托给海盗统治。从马耳他岛至距离最近的突尼斯，不可能开辟像从小亚细亚到罗得岛那样的补给线。

        土耳其方面的第三个不利之处是，由于骑士们在好几个半岛上修筑了要塞，马耳他岛上骑士团的防卫与以往不同，因此土耳其军无法将攻击集中于一点。尽管防守方也将兵力分散在几处，但攻击方也没能避免兵力的分散。这一点对不善于制订缜密作战计划，总凭数量进行强攻的土耳其军来说，产生的负面效果远远超过了骑士团。另一方面，拉·瓦莱特却知道于己有利的作战方法，只需超水平地充分发挥分散防卫线的有利之处便可有效防守。

        第四个不利之处是，马耳他岛离西西里岛很近。当时的西西里岛处在西班牙统治之下。西班牙已进入了卡洛斯的儿子、腓力二世的时代。腓力二世绝不可能愿意看到土耳其势力渗透到本国领地西西里岛。接到土耳其帝国决定进攻马耳他岛的情报后，骑士团大团长曾请求西班牙国王派遣援军，国王当时的回应是将派出16 000名援军。虽然拉·瓦莱特表示，只要不眼见为实，就不会相信君主说的话，但如果马耳他岛落入土耳其之手的话，比任何人都会先陷入窘境的正是西班牙国王。

        战争在5月中旬土耳其全军登陆完毕时打响。攻防战以超过罗得岛那次的激烈程度展开。不过，对防守方来说最大的有利之处就是城塞内没有普通居民。尽管被分散在几个地点，但守在要塞里的只有纯战斗人员。无论战况如何对防守方不利，也无须担心居民的士气会发生变化。是否坚守到底，由骑士团大团长一个人的意志来决定。

        众所周知，拉·瓦莱特是一个拥有铁一般意志的人。

        可能是因为骑士团一旦失去马耳他岛，就将走投无路，拉·瓦莱特一直无视穆斯塔法帕夏提出的谈判请求。是坚守到底，还是战死疆场，失去罗得岛这一最佳巢穴的“蛇”，对于要夺走其巢穴的人，可能有一种要用毒牙猛咬上去的心态吧。穆斯塔法帕夏将抓到的骑士砍头后，用大炮将其头颅发射过来时，拉·瓦莱特也把土耳其士兵的头颅发射了回去。

        在攻防战持续时间即将逼近4个月的9月6日，西西里总督派遣的8 000名士兵赶到。人数虽然只是腓力二世承诺的一半，但对因拖延已久的攻防战和不尽如人意的战果，以及己方损失的惨重而士气低落的土耳其军来说，已足以让他们做出解除包围的决断。据说，离开马耳他岛，回到君士坦丁堡的土耳其军人数已减少至出征时的三分之一。战败负责人穆斯塔法帕夏因苏莱曼可能做出的惩罚而战战兢兢，但苏莱曼并没有表示多少愤怒。也许是因为苏莱曼和穆斯塔法帕夏都已垂老了吧。

        不知苏莱曼是否知道在罗得岛攻防战时曾见过两面的年轻法兰西骑士就是马耳他岛攻防战的最大功臣。如果知道的话，也许他会对罗得岛时代自己的绅士行为而感到后悔吧。苏莱曼大帝在这年之后死去。

        另一方面，拉·瓦莱特则在这之后又活了3年。他对损毁严重的要塞进行修复和加固，使其达到即使土耳其大军再次袭来也可以坚持一阵的状态后，于1568年去世。

        自此以后，由骑士团修建成要塞并面对港湾的这一带，自然地成为马耳他岛的首府，取名为“瓦莱塔”，并沿用至今。圣约翰骑士团因败给拿破仑而离开此地后，马耳他岛变为法兰西领地，接着又变为英国领地，现在已成为一个独立共和国，但只有首府至今仍称瓦莱塔。
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